Bakterijų tyrimas yra labai svarbus žmonėms. Iki šiol buvo atrasta labai daug prokariotų, kurie skiriasi vienas nuo kito patogeniškumu, paplitimo sritimi, forma, dydžiu, žvynelių skaičiumi ir kitais parametrais. Norint išsamiai ištirti šią padermę, naudojamas bakteriologinis tyrimo metodas.
Kokie yra bakterijų ląstelių analizės metodai?
Norint nustatyti, ar bakterijos yra patogeniškos, kultūra tiriama įvairiais būdais. Tarp jų:
1. Bakterioskopinis metodas.
2. Bakteriologinis metodas.
3. Biologinis metodas.
Bakterioskopiniai ir bakteriologiniai tyrimo metodai yra pagrįsti tiesiogiai darbu su prokariotinėmis ląstelėmis, kai reikia atlikti biologinę analizę, norint ištirti tokių ląstelių poveikį gyvam eksperimentinių gyvūnų organizmui. Pagal tam tikrų ligos požymių pasireiškimo laipsnį mokslininkas gali padarytiišvada apie patogeninių bakterijų buvimą ar nebuvimą mėginyje, taip pat natūraliai jas daugintis gyvūno organizme, norint gauti jų kultūrą ir panaudoti kituose darbuose.
Bakteriologinis tyrimo metodas skiriasi nuo bakterioskopinio. Pirmajame analizei naudojama specialiai paruošta gyvų prokariotų kultūra, o antrajame – darbas su negyvomis arba gyvomis ląstelėmis ant stiklelio.
Bakteriologinio tyrimo metodo etapai. Mikrobiologija
Bakterijų kultūros savybių tyrimo principas gali būti naudingas tiek mikrobiologams, kurie užsibrėžė tikslą tirti prokariotines ląsteles, tiek laborantams, kurių užduotis – nustatyti bakterijų patogeniškumą ar nepatogeniškumą, ir tada nustatykite paciento diagnozę.
Bakterijų tyrimo metodas yra padalintas į tris etapus:
1. Bakterijų išskyrimas iš pradinio mėginio.
2. Sėti bakterijas ir auginti grynąją kultūrą, tirti jos savybes.
3. Išsamus bakterijų ląstelių tyrimas.
Pirmasis etapas
Mėginys arba tepinėlis paimamas nuo laisvo terpės paviršiaus arba iš paciento. Taip gauname „kokteilį“iš daugelio rūšių bakterijų, kurias būtina pasėti ant maistinės terpės. Kartais tampa įmanoma nedelsiant išskirti reikalingas bakterijas, žinant jų pasiskirstymo organizme židinius.
Po dviejų ar trijų dienų parenkamos norimos kolonijos irSterilios kilpos pagalba sėjamos ant kietos Petri lėkštelių terpės. Daugelis laboratorijų dirba su mėgintuvėliais, kuriuose gali būti kietų arba skystų maistinių medžiagų. Taip atliekamas bakteriologinis mikrobiologijos tyrimo metodas.
Antras etapas
Gavus atskiras bakterijų kolonijas, atliekama tiesioginė makro- ir mikroanalizė. Išmatuojami visi kolonijų parametrai, nustatoma kiekvienos iš jų spalva ir forma. Neretai skaičiuojamos kolonijos Petri lėkštelėje ir pradinėje medžiagoje. Tai svarbu tiriant patogenines bakterijas, kurių skaičius priklauso nuo ligos laipsnio.
Bakteriologinis tyrimo metodas, kurio 2 etapas – atskirų mikroorganizmų kolonijų tyrimas, gali būti siejamas su biologiniu bakterijų analizės metodu. Kitas šio etapo darbo tikslas – padidinti žaliavos kiekį. Tai galima padaryti maistinėje terpėje arba galite atlikti eksperimentą in vivo su gyvais eksperimentiniais organizmais. Patogeninės bakterijos dauginsis, todėl kraujyje bus milijonai prokariotinių ląstelių. Iš paimto kraujo nesunku paruošti reikiamą bakterijų darbo medžiagą.
Trečias etapas
Svarbiausia tyrimo dalis – bakterijų kultūros morfologinių, biocheminių, toksikogeninių ir antigeninių savybių nustatymas. Darbas atliekamas su iš anksto išvalytomis kultūromis ant maistinės terpės, taip pat su preparatais (dažnai nudažytais) mikroskopu.
Nustatyti nuosavybės teisępatogenines ar oportunistines bakterijas vienai ar kitai sisteminei grupei, taip pat nustatyti jų atsparumą vaistams, leidžia atlikti bakteriologinį tyrimo metodą. 3 etapas – antibiotikai, t.y. bakterijų ląstelių elgsenos analizė vaistų kiekio aplinkoje sąlygomis.
Sėlos atsparumo antibiotikams tyrimas turi didelę praktinę reikšmę, kai reikia skirti konkrečiam pacientui reikalingus, o svarbiausia, veiksmingus vaistus. Čia gali padėti bakteriologinio tyrimo metodas.
Kas yra augimo terpė?
Norint vystytis ir daugintis, bakterijos turi būti iš anksto paruoštose maistinėse terpėse. Pagal konsistenciją jie gali būti skysti arba kieti, o pagal kilmę – augaliniai arba gyvūniniai.
Pagrindiniai žiniasklaidos reikalavimai:
1. Sterilumas.
2. Maksimalus skaidrumas.
3. Optimalūs rūgštingumo, osmosinio slėgio, vandens aktyvumo ir kitų biologinių verčių rodikliai.
Išskirtų kolonijų gavimas
1. Drygalsky metodas. Jį sudaro tai, kad ant bakterijų kilpos užtepamas tepinėlis su įvairių tipų mikroorganizmais. Ši kilpa pervedama išilgai pirmosios Petri lėkštelės su maistine terpe. Be to, nekeičiant kilpos, antrosios ir trečiosios Petri lėkštelėse atliekamas likutinės medžiagos metodas. Taigi paskutiniuose kolonijos mėginiuose bakterijos nebus pasėtos per tankiai, todėl bus lengviau rasti darbui reikalingus.bakterijos.
2. Kocho metodas. Tam naudojami mėgintuvėliai su išlydyta maistine terpe. Ten dedama kilpa arba pipetė su bakterijų tepinėliu, po to mėgintuvėlio turinys supilamas ant specialios plokštelės. Agaras (arba želatina) po kurio laiko sukietėja, jo storyje nesunku rasti norimas ląstelių kolonijas. Prieš pradedant darbą svarbu atskiesti bakterijų mišinį mėgintuvėliuose, kad mikroorganizmų koncentracija nebūtų per didelė.
Bakteriologinis tyrimo metodas, kurio etapai pagrįsti norimos bakterijų kultūros išskyrimu, neapsieina be šių dviejų izoliuotų kolonijų radimo metodų.
Antibiograma
Vizualiai bakterijų reakciją į vaistus galima pamatyti dviem praktiškais būdais:
1. Popieriaus disko metodas.
2. Bakterijų ir antibiotikų veisimas skystoje terpėje.
Taikant popierinio disko metodą, reikalinga mikroorganizmų kultūra, užauginta kietoje maistinėje terpėje. Ant tokios terpės uždėkite keletą suapvalinto popieriaus gabalėlių, suvilgyto antibiotikais. Jei vaistas sėkmingai susidoroja su bakterijų ląstelių neutralizavimu, po tokio gydymo atsiras plotas, kuriame nėra kolonijų. Jei reakcija į antibiotiką yra neigiama, bakterijos išliks.
Jei naudojate skystą maistinę terpę, pirmiausia paruoškite kelis mėgintuvėlius su skirtingų praskiedimų bakterijų kultūra. Į šiuos mėgintuvėlius dedama antibiotikų, o dienos metu stebimas medžiagos ir mikroorganizmų sąveikos procesas. Dėl to gaunama kokybiška antibiograma, pagal kurią galimaįvertinti vaisto veiksmingumą tam tikram derliui.
Pagrindinės analizės užduotys
Čia išvardyti bakteriologinio tyrimo metodo tikslai ir etapai.
1. Gaukite pradinę medžiagą, kuri bus naudojama bakterijų kolonijoms išskirti. Tai gali būti bet kokio daikto paviršiaus, gleivinės ar žmogaus organo ertmės tepinėlis, kraujo tyrimas.
2. Kultūros auginimas kietoje maistinėje terpėje. Po 24-48 valandų Petri lėkštelėje galima rasti įvairių bakterijų tipų kolonijų. Pagal morfologinius ir/ar biocheminius kriterijus parenkame norimą ir atliekame su juo tolesnį darbą.
3. Gautos kultūros dauginimas. Bakteriologinio tyrimo metodas gali būti pagrįstas mechaniniu arba biologiniu bakterijų kultūrų skaičiaus didinimo metodu. Pirmuoju atveju dirbama su kietomis arba skystomis maistinėmis terpėmis, ant kurių termostate dauginasi bakterijos ir suformuoja naujas kolonijas. Biologinis metodas reikalauja natūralių sąlygų bakterijų skaičiui didinti, todėl čia eksperimentinis gyvūnas užsikrečia mikroorganizmais. Po kelių dienų kraujo mėginyje arba tepinėlyje galima rasti daug prokariotų.
4. Darbas su išgryninta kultūra. Norint nustatyti sisteminę bakterijų padėtį, taip pat jų priklausymą patogenams, būtina atlikti nuodugnią ląstelių analizę pagal morfologines ir biochemines savybes. Tiriant patogenines mikroorganizmų grupes svarbu žinotikiek veiksmingi antibiotikai.
Tai buvo bendra bakteriologinio tyrimo metodo charakteristika.
Analizės ypatybės
Pagrindinė bakteriologinių tyrimų taisyklė – maksimalus sterilumas. Jei dirbate su mėgintuvėliais, bakterijų kultūros ir subkultūros turėtų būti atliekamos tik ant įkaitintos spiritinės lempos.
Visiems bakteriologinio tyrimo metodo etapams reikia naudoti specialią kilpą arba Pasteur pipetę. Abu įrankiai turi būti iš anksto apdoroti alkoholio lempos liepsna. Kalbant apie Pasteur pipetę, čia prieš terminę sterilizaciją reikia pincetu nulaužti pipetės galiuką.
Bakterijų sėjimo technika taip pat turi savo ypatybių. Pirmiausia, sėjant ant kietos terpės, bakterinė kilpa praeina per agaro paviršių. Žinoma, kilpos paviršiuje jau turėtų būti mikroorganizmų mėginys. Taip pat praktikuojama inokuliacija į auginimo terpę, tokiu atveju kilpa arba pipetė turi pasiekti Petri lėkštelės dugną.
Dirbant su skysta terpe, naudojami mėgintuvėliai. Čia svarbu užtikrinti, kad skysčiai neliestų laboratorinių stiklinių indų ar kamščių kraštų, o naudojami instrumentai (pipetė, kilpa) nesiliestų su pašaliniais daiktais ir paviršiais.
Biologinio tyrimo metodo svarba
Bakterijų mėginių analizė turi praktinį pritaikymą. Visų pirmabakteriologinio tyrimo metodas gali būti naudojamas medicinoje. Pavyzdžiui, norint nustatyti teisingą diagnozę, taip pat parengti teisingą gydymo kursą, būtina ištirti paciento mikroflorą. Čia padeda antibiograma, kuri parodys vaistų aktyvumą prieš patogeną.
Bakterijų analizė laboratorijoje naudojama pavojingoms ligoms, tokioms kaip tuberkuliozė, pasikartojantis karščiavimas ar gonorėja, nustatyti. Jis taip pat naudojamas tiriant tonzilių, organų ertmių bakterinę sudėtį.
Aplinkos užterštumui nustatyti galima taikyti bakteriologinio tyrimo metodą. Remiantis duomenimis apie kiekybinę ir kokybinę tepinėlio iš objekto paviršiaus sudėtį, nustatomas šios aplinkos mikroorganizmų populiacijos laipsnis.
